¿Cómo se elabora o prepara RI-002?

El Producto IVIG en investigación (RI-002; con los datos proporcionados por ADMA Biológics) fue fabricado utilizando fraccionamiento de Cohn. La FDA publicó las especificaciones de la inmunoglobulina intravenosa e incluyó el plasma de los donantes con altos niveles de anticuerpos contra el
VRS (Virus sincitial respiratorio)

Un donante con altos niveles de RSV se determinó mediante pruebas de ensayo de neutralización RSV (MNA). El Producto IVIG fue probado y puesto en libertad para cumplir con las directrices de la FDA para el tratamiento de pacientes con IDP, 

se exige que el grupo de donantes provenga de al menos 1.000 donantes y contenga niveles mínimos de protección para el sarampión, la poliomielitis, el tétanos y la Hepatitis B. Por lo tanto, RI-002 (ADMA Biológics Inc.) fue fabricado para lograr niveles estandarizados de potencia anti-RSV, así como cumplir todas las normas requeridas para una IgIV policlonal disponible comercialmente. Es de destacar que esta última característica no era una característica de la inmunoglobulina hiperinmune policlonal RSV previamente disponible. 

Por lo tanto, RI-002 cumplió con los estándares para el sarampión, la poliomielitis y la difteria (niveles que se ajustan al ≥0.60 CBER referencia, ≥0.28 CBER Referencia y ≥1.21 U / ml, respectivamente), con valores de 0,73 a 2,70 CBER referencia, 0,83-1,24 CBER de referencia, y 8,00 a 11,25 U / ml, respectivamente.

Recolección de Donantes para la muestra y purificación por cromatografía de proteína-A

Las muestras de plasma de 20 donantes aleatorios fueron recolectadas a través de un centro de recogida de plasma comercial y todos los donantes proporcionaron su consentimiento por escrito para la prueba de niveles de patógenos. Todas las muestras de plasma y de los donantes se recogieron en los Estados Unidos, en los centros de recogida autorizados por la FDA utilizando procedimientos estándares de operación aprobados y métodos de prueba aprobados, y todos los donantes fueron compensados ​​por su donación (Compensación económica) de acuerdo con las políticas de la FDA. Cada donante debe haber consentido en que su plasma sera utilizado para diversos propósitos, incluyendo pero no limitado a la fabricación comercial, pruebas adicionales de laboratorio, reactivos, etc. plasma se purificó por cromatografía de proteína-A en sus fracciones de Ig. Una proteína de resina a granel recombinante Sepharose FF se lavó y se envasa en 15 ml cónicos y se diluyó con un volumen igual de tampón y se centrifugó a 2500 rpm durante 5 min. Los sobrenadantes se eliminaron para Protein-A cromatografía y los pellets descartan. Los sobrenadantes de las muestras se transfieren a columnas Protein-A correspondiente a la muestra número de identificación. El flujo a través de aproximadamente 6 ml se recogió por flujo por gravedad. Dos CV (4 ml) de tampón de equilibrio se pasó a través de las columnas, en combinación con el flujo a través del volumen y se almacenó a 4 ° C. El material unido de cada columna se eliminó con 5 ml de tampón de elución (0,1 M citrato, pH 3,4) y se recogio en tubos de 15 ml cónicos que contienen 400 l de 3 M de base Tris para traer los eluidos a pH 7,8. Las columnas fueron centrifugadas como se describe anteriormente para recoger todo el tampón de elución. El volumen final de cada elución fue de 6,0 ml.La Recuperación de Ig se calculó en base a la absorbancia a 280 nm / 1.4 de 1: 5 diluciones de alícuotas de muestra.

La fracción Ig purificada se llevó a cabo tres veces por separado para la determinación de los niveles de anticuerpos usando el test ELISA como para las preparaciones de IgIV. Los títulos de anticuerpos a cada uno de los nueve virus respiratorios se obtuvieron de cada ejecución repetida en tres ocasiones separadas; y los resultados transformados a log ₂ escala.